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利用曲菌的蛋白發(fā)現(xiàn)系統(tǒng)取得高產(chǎn)脂肪酶
日本不僅重視其特有的生物酒精技術(shù)開發(fā),還很重視與歐洲各國的技術(shù)協(xié)作,開發(fā)生物燃燒能源(BDF)技術(shù)。BDF的技術(shù)開發(fā)歐洲占全世界的90%,該技術(shù)在生產(chǎn)中會(huì)排出約10%的含堿甘油,這種副產(chǎn)物目前尚無有效的利用途徑。一種固定化酶技術(shù)可以使上述情況得到改善,用該技術(shù)可得到高純度的甘油,但由于反應(yīng)過于緩慢尚未達(dá)到工業(yè)化的地步,為滿足這一需求,各國正在開發(fā)高活性的固定化酶。
日本利用十分熟悉的食品釀造用絲狀菌ASP.ORYZAR、ASP.NIPGER等曲菌,對其進(jìn)行遺傳性改良,包括對曲菌—葡糖苷酶基因啟動(dòng)子的改良和5’UTR(非翻譯區(qū))*適性的確認(rèn)等,得到了高活性的脂肪酶。轉(zhuǎn)基因蛋白質(zhì)的得率高低,*重要的是轉(zhuǎn)錄,有必要通過多次反復(fù)利用淀粉酶基因中的基點(diǎn)元件而活化轉(zhuǎn)錄。曲菌—葡糖苷酶遺傳基因的啟動(dòng)子連續(xù)存在著2個(gè)被稱為REGION111的區(qū)域,在這里,對各種啟動(dòng)子12次反復(fù)導(dǎo)入REGION111然后對比大腸菌的葡萄糖醛酸酶(GUS)基因,發(fā)現(xiàn)源于ASP.ORYZAR葡糖淀粉酶基因的啟動(dòng)子活性提高了約4倍,源于ASP.NIPGER NO.8的啟動(dòng)子提高了6倍。再者,對曲菌的糖酵解基因中*常見的烯醇酶啟動(dòng)子導(dǎo)入REGION111其啟動(dòng)子活性提高了20多倍。接下來是通過改變5’UTR進(jìn)而提高翻譯調(diào)控的效率。在啟動(dòng)子P_NO8142的下流導(dǎo)入了包含源于PB1221的5’UTR,用它來置換曲菌的糖酵解酶基因的5’UTR,發(fā)現(xiàn)GUS的活性提高了8倍。
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